色谱常见十四种使用问题的详细解答

作者:系统管理员           发布时间:2015-09-17 10:30:48

问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,
   原因何在?如何解决? 

答:关于漂移问题: 
    1 、温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定 
    2 、流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 
    3 、柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡 
    关于快速变化问题  
    1 、流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定 
    2 、泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。 
    3 、流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行
        适当混合 

问:色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题 ? 
答:1 、柱效要高 
    2 、热稳定性好 
    3 、化学惰性强 
    具体选择应注意  
    1 、柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析 
    2 、柱子内径。内径大小决定柱容量 
    3 、液膜厚度。分析样品温度一不一样,对膜厚有不同要求,温度高液膜要
        厚,温度低液膜要薄 
    4 、柱长度。柱越长,柱效越高,分离效果越好,但也存在吸附问题,柱子
        过长,分析时间长,因此要根据样品考虑柱子长度 
    5 、外涂层 ( 柱体 ) 的选择 
    6 、另外还有仪器型号、分析对象等因素 

问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么 ? 
答:1、筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。 
     2、存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性
        好的柱子 

问:从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏 ? 
答:1、分配容量 ( 或容量因子 )K ,好的柱子在高温运行后,分配容量K不应
       有明显的下降,否则,说明柱子的热稳定性不好。 
    2、理论塔板数 n ,热稳定性好的柱子经受高温后,理论塔板数应基本保持
       恒定 
    3、柱子的极性。热稳定性好的柱子,高温前后极性变化不大,具体表现为保
       留指数I值没有大的变化。 
    4、噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后,噪声不能增加 . 
    5、柱子的去活层,毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增
       加惰性。
       质量好的毛细管柱子高温后,去活层不应该变化,表现在对强极性样品或
       酸碱性样品的吸附性不能增加。 

问:为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响 ? 
答:进样器内的玻璃衬套主要有下列作用:  
     1、提供一个温度均匀的汽化室,防止局部过热。 
     2、玻璃的惰性不如不锈钢好,减少了在汽化期间样品分解的可能性。 
     3、易于拆换清洗 ,以保持清洁的汽化室表面,一些痕量非挥发性组分会逐
        渐积累残存于汽化室,高温下会慢慢分解,使基流增加,噪声增大,通过
        清洗玻璃衬套可以消除这种影响。 
     4、可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套,以改变汽化室的体积,
        而不用更换整个进样加热块。从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱
        行为造成影响的原因。 

问:毛细管色谱分流进样时,非线性分流的主要原因是什么 ? 
答:1、进样器温度太低,样品汽化不完全,发生分级分流。 
     2、进样器温度太高,某些组分可能发生热分解,也有的样品可能发生催化
        分解,或样品部分地被吸附在进样器内表面上。 
     3、在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。 
     4、系统的进样垫,柱接头等地方漏气。 

问:HPLC 灵敏度不够的主要原因及解决办法 
答:1 、样品量不足:解决办法为增加样品量 
     2 、样品未从柱子中流出:可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 
     3 、样品与检测器不匹配:根据样品化学性质调整波长或改换检测器 
     4 、检测器衰减太多:调整衰减即可。 
     5 、检测器时间常数太大:解决办法为降低时间参数 
     6 、检测器池窗污染:解决办法为清洗池窗。 
     7 、检测池中有气泡:解决办法为排气。 
     8 、记录仪测压范围不当:调整电压范围即可。 
     9 、流动相流量不合适:调整流速即可。 
     10 、检测器与记录仪超出校正曲线:解决办法为检查记录仪与检测器,
        重作校正曲线。

问:做 HPLC 分析时,柱压不稳定,原因何在 ? 如何解决 ? 
答:原因可能有:  
     1、泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理; 
     2、比例阀失效,更换比例阀即可。 
     3、泵密封垫损坏,更换密封垫即可。 
     4、溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法; 
     5、系统检漏,找出漏点,密封即可。 
     6、梯度洗脱,这时压力波动是正常的。 

问:做 PGS/MS 分析时,如何防止焦油状污染物进入毛细柱 ? 
答:聚合物,尤其是一些含氮、硫及卤素的高分子裂解时,常有焦油状物质产生。为防止这种焦油状物质进入毛细柱造成污染而使柱性能下降,可采用保护预柱,即在裂解器与毛细柱之间接一填充预柱,通过控制预柱温度而使焦油状物质滞留在预柱内,预注可置于 GC 气化室内,这样既容易控制温度,又减少系统的死体积,当然,预柱填料需经常更换。 

问:我最近更换了另一种牌号的ODS柱,虽然分离情况仍可以,但保留
   时间不能重现,为什么?
 
答:这是因为被分析物可能具有形成氢健的能力。尽管过去几年来,填料的制造技术有了极大的提高,但不同的厂商的 ODS 填料 表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此,同一被分析物中的各组分在不同牌号的 ODS 柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物,如三乙基胺 (TEA) ,将会使硅醇基的成键能力饱和,从而保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。 

问:我购买的 HPLC 柱验收测试时柱压过高,请问为什么? 
答:柱压过高是 HPLC 柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。 
     1、拆去保护柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查; 
     2、把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查。 
     3、将柱子的进出口反过来接在仪器上,用 10 倍柱体积的流动相冲洗柱子, ( 此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动性) 。这时,如果柱压仍不下降,再检查;    
     4、更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,请与厂商联系。一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题, SGE 提供的 Rheodyne7315 型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。 

问:高温毛细柱的使用寿命一般为多长 ? 
答:毛细柱寿命除决定于柱子本身的性能外,在很大程度上取决于使用情况,比如使用温度、样品状态,进样量等,如果在其使用温度范围内,样品干净,色谱柱不被污染的情况下,柱子寿命一般在 2—3 年之间。

问:如毛细管柱被污染,柱效和分辨率降低,有何方法使它恢复? 
   是否可通过老化来解决? 

答:根据柱污染程度可采取不同的方法来解决,如果污染不严重,污染物沸点不是太高,可通过老化来解决,但老化温度不可超过柱子的最高使用温度,且一般要较长时间 (8—30 小时 ) ,如果污染较严重,或通过老化仍不能使柱性能恢复,那就必须采用溶剂清洗,通常是用 5 倍柱容积的溶剂 ( 如正戊烷,二氯甲烷等 ) 通过色谱柱。当然,清洗溶剂用的越多,对柱性能的损坏越大,清洗完后,在通载气老化一定时间,如果柱性能恢复,便可继续使用。必须指出:只有交联柱才能清洗,对于非交联柱,清洗柱会彻底失效,因为固定液被洗掉了,至于清洗用溶剂的选择,可参考说明书。 

问:BPX70 毛细管柱是否可用于 GC/MS 分析 ? 
答:完全可以, BPX70 为极性柱,使用温度范围宽 (25—260 ℃) ,程序升温可达 290 ℃,流失低,适合于分析脂肪酸甲酯的各种位 
置和几何异构体,药物异构体,碳水化合物等。因 BPX70 为交联住,故用于 GC/MS 很稳定,污染后可清洗再生。